SuperQuickRT cDNA第--鏈合成試劑盒說(shuō)明書

SuperQuickRT cDNA Kit

（For Real-time PCR）

SuperQuickRT cDNA第--鏈合成試劑盒

（For Real-time PCR）

目錄號(hào)：K2381

保存條件：-20℃。

規(guī)格說(shuō)明

     Cat. No.                   K2381B      K2381

     Kit Size                    25         100

     SuperQuickRT Mix              12.5 μl      50 μl

     5×RT Buffer（For Real-time PCR）   55 μl       220 μl

     Primer Mix                  27.5 μl     110 μl

     dNTP Mix (2.5 mM Each)          55 μl       220 μl

     RNase-Free Water              1 ml        1 ml

本產(chǎn)品僅供科研使用，請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途  

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

　　本產(chǎn)品是為Real-time  RT-PCR研發(fā)的快速逆轉(zhuǎn)錄試劑，其包含從RNA模板逆轉(zhuǎn)錄

成cDNA第--鏈所需的全部試劑，優(yōu)化的反應(yīng)體系為快速逆轉(zhuǎn)錄酶提供更可靠的反應(yīng)條

件。SuperQuickRT逆轉(zhuǎn)酶逆轉(zhuǎn)錄效率高，可對(duì)少量RNA模板進(jìn)行良好的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，

15分鐘即可完成熒光定量 PCR模板cDNA第--鏈合成。另外，逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)溫度可以提

高到50 ºC，可通讀GC含量高和二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板。

產(chǎn)品特點(diǎn)

1．快速：42 ºC，15min可完成cDNA第--鏈合成。

2．反轉(zhuǎn)錄效率高：反轉(zhuǎn)錄效率高于90%。

3．靈敏度高：pg級(jí)模板也可以得到高質(zhì)量的cDNA。

4．通讀復(fù)雜模板：GC含量高和二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜模板。

注意事項(xiàng)

1．在操作過(guò)程中應(yīng)避免RNase污染，防止RNA降解或?qū)嶒?yàn)中的交叉污染，建議操作人

   員帶口罩和一次性手套并經(jīng)常更換手套，使用專門的儀器和耗材。

2．逆轉(zhuǎn)錄體系配制在冰上進(jìn)行操作，防止RNA發(fā)生降解。試劑盒的酶使用后盡快置于

   -20 ºC保存，并盡量避免反復(fù)凍融。

3．Primer Mix是由Oligo(dT)和random primer配制而成，也可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要選用Oligo-dT

   Primer或Gene Specific Primer。

4．反應(yīng)體系可倍比放大，10 μl反應(yīng)體系可zui大使用1μg總RNA。

5．對(duì)于二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板，建議在操作步驟之前，將模板RNA在65℃孵育5min立刻置于冰上，短暫離心后進(jìn)行下一步操作。

操作步驟

1．將模板RNA在冰上解凍；將試劑盒組分在室溫解凍后立刻置于冰上，使用前將每種

   溶液渦旋振蕩混勻，并經(jīng)短暫離心后使用。

2．根據(jù)以下表格配制反應(yīng)體系，渦旋震蕩混勻，短暫離心，使管壁上的溶液收集到管底。

試劑                 10 μl反應(yīng)體系           終濃度

dNTP Mix (2.5 mM Each)         2 μl               500 μM Each

Primer Mix                 1 μl

                         1）

RNA Template                X μl              10 pg～1 µg2）

5×RT Buffer（for Real-time PCR）  2 μl              1×

SuperQuickRT Mix             0.5 μl

RNase-Free Water             up to 10 μl

   注意：1）根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要可使用Oligo-dT Primer或Gene Specific Primer，建議10 μl 反應(yīng)體系加入Oligo-dT Primer 25 pmol，或Gene Specific Primer 2.5 pmol 。

2）如果總RNA量大于1 µg，請(qǐng)按比例擴(kuò)大反應(yīng)體系。

3．42℃孵育15分鐘。

   注意：對(duì)于二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜或GC含量高的模板，可以提高逆轉(zhuǎn)錄溫度至50℃，增強(qiáng)逆轉(zhuǎn)錄效率。

4．85℃孵育5分鐘，使逆轉(zhuǎn)錄酶失活。

5．短暫離心后置于冰上，再進(jìn)行后續(xù)Real-time PCR檢測(cè)，如果需要長(zhǎng)時(shí)間保存，請(qǐng)置于-20℃。

注意：進(jìn)行Real-time PCR反應(yīng)時(shí)，逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的加量應(yīng)不超過(guò)PCR反應(yīng)總體積的1/10。

相關(guān)產(chǎn)品信息

目錄號(hào)           產(chǎn)品名稱                   產(chǎn)品特點(diǎn)

K0580        TRIzon總RNA提取試劑         適用范圍廣的RNA提取試劑

K0581        超純RNA提取試劑盒   兼具有適用范圍廣和純度高特點(diǎn)的RNA提取試劑

K0597        超純RNA提取試劑盒（含DNaseI）   靈敏度高，可識(shí)別pg級(jí)別的模板。

K0741        SuperRT cDNA第--鏈合成試劑盒  與RNA親和力強(qiáng)，能夠通讀GC含

量高，二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板。

K2569        HiFiScript cDNA第--鏈合成試劑盒    高效獲得cDNA產(chǎn)物逆轉(zhuǎn)錄（針對(duì)于熒光定量PCR）

 SuperQuickRT cDNA第--鏈合成試劑盒(For Real-time PCR)

K2381                        僅需15分鐘，即可完成熒光定量PCR所需的cDNA即用型逆轉(zhuǎn)錄mix，只需加入RNA和水

                             SuperQuickRT MasterMix

K2391                                                即可反應(yīng)。僅需15分鐘，即可完成熒光                     (for Real-Time PCR)

定量PCR所需的cDNA                      熒光定量PCR—SYBR Green法

K0957        UltraSYBR Mixture       特異性強(qiáng)、靈敏度低、擴(kuò)增效率高

                                     熒光定量PCR—Taqman法

K0932        GoldStar Taqman Mixture   特異性強(qiáng)、靈敏度低、擴(kuò)增效率高

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