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      Annexin V-FITC/PI 凋亡檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
      點(diǎn)擊次數(shù):2133 更新時(shí)間:2020-09-23

      Annexin V-FITC/PI 凋亡檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

                       

                                                                                                  

      Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit 

       

      目錄號(hào):K2574 

      保存:2-8℃避光保存 

       

      組分說(shuō)明

       

                                                    Cat.No.              K2574

                                                     KitSize                50

                                               4×BindingBuffer             10ml

                                             PropidiumIodide,PI           500 μl 

                                                AnnexinV-FITC             250 μl

       

      產(chǎn)品簡(jiǎn)介 

       

          AnnexinV-FITC/PI 凋亡檢測(cè)試劑盒是一種采用AnnexinV-FITC 與 PI 雙染法進(jìn)行細(xì)胞早期凋亡分析的檢測(cè)試劑盒。細(xì)胞凋亡早期改變發(fā)生在細(xì)胞膜表面,這些細(xì)胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細(xì)胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外,使PS暴露在細(xì)胞膜外表面。PS是一種帶負(fù)電荷的磷脂,正常主要存在于細(xì)胞膜的內(nèi)面,在細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)細(xì)胞膜上的這種磷脂分布的不對(duì)稱性被破壞而使PS暴露在細(xì)胞膜外。AnnexinV具有易于結(jié)合到磷脂類(lèi)如PS的特性,對(duì)PS有高度的親和性。因此,該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測(cè)暴露在細(xì)胞膜表面的PS。PS轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外不是凋亡所*的,也可發(fā)生在細(xì)胞壞死中。兩種細(xì)胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細(xì)胞膜是完好的,而細(xì)胞壞死在其早期階段細(xì)胞膜的完整性就被破壞。另外一種活細(xì)胞非透過(guò)性熒光染料碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)不能通過(guò)完整的活細(xì)胞,但能夠?qū)乃篮偷蛲鐾砥诘募?xì)胞進(jìn)行染色,因此通常將AnnexinV 與PI 配合染色,以區(qū)別凋亡早期細(xì)胞與壞死細(xì)胞和凋亡的晚期細(xì)胞。

       

      注意事項(xiàng) 

       

      1.  本試劑盒需使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)。

      2.  需自備PBS 和去離子水。

      3.  熒光染料均存在淬滅問(wèn)題,保存和使用過(guò)程中請(qǐng)盡量注意避光,以減緩熒光淬滅。

      4.  PI 對(duì)人體有刺激性,請(qǐng)注意適當(dāng)防護(hù)。

      5.  請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

       

      操作步驟 

       

      1. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:

          a. 對(duì)于貼壁細(xì)胞:小心收集細(xì)胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。用胰酶消化細(xì)胞,至細(xì)胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打

      下來(lái)時(shí),加入前面收集的細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下所有的貼壁細(xì)胞,并輕輕吹散細(xì)胞。再次收集到離心管內(nèi)。1000×g 左右離心3-5 分鐘,沉淀細(xì)胞。對(duì)于特定的細(xì)胞,如果細(xì)胞沉淀不充分,可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50μl 左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細(xì)胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的    PBS,重懸細(xì)胞,再次離心沉淀細(xì)胞,小心吸除上清。再次加入1ml4℃預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞,再次離心沉淀細(xì)胞。

          b. 對(duì)于懸浮細(xì)胞:1000×g 左右離心3-5 分鐘,沉淀細(xì)胞。對(duì)于特定的細(xì)胞,如果細(xì)胞沉淀不充分,可以適當(dāng)延長(zhǎng)離心時(shí)間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約 50 微升左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細(xì)胞。加入約1 ml 4℃預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞,并轉(zhuǎn)移到1.5 毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細(xì)胞,小心吸除上清,可以殘留約 50μl 左右的PBS,以避免吸走細(xì)胞。再次加入1ml4℃預(yù)冷的PBS,重懸細(xì)胞,再次離心沉淀細(xì)胞。

      2.  用去離子水按 1:4 稀釋BindingBuffer(4mlBindingBuffer+12ml 去離子水);

      3.  用 250μlBindingBuffer 重新懸浮細(xì)胞,調(diào)節(jié)其濃度為 1×106/ml;

      4.  取 100μl 的細(xì)胞懸液于5ml流式管中,加入5μlAnnexinV/FITC和10μl20μg/ml的PI 溶液;

      5.  混勻后于室溫避光孵育15分鐘;

      6.  在反應(yīng)管中加400μlPBS,流式細(xì)胞儀(FACS)分析。

          

           

      實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

       

      免疫組化IHC染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

      細(xì)胞、組織TUNEL凋亡染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

      試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

      實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

       

      透射電鏡服務(wù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

      石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

      核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

      免疫共沉淀(CHIRP)實(shí)驗(yàn)

      RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實(shí)驗(yàn)代做

      酶聯(lián)免疫(ELISA)技術(shù)服務(wù)

      雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

      喹諾酮類(lèi)快速檢測(cè)試劑盒

      組織芯片/微陣列定制技術(shù)服務(wù)

       

      染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

       

      多因子液相芯片技術(shù)(Luminex)實(shí)驗(yàn)

      免疫細(xì)胞化學(xué)ICC實(shí)驗(yàn)服務(wù)

      ATP/ADP檢測(cè)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

      蛋白雙向(2-D)電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)

      蛋白相互作用分析

      堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

      PKC活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

      非標(biāo)定量實(shí)驗(yàn)

      (Label-free)

       

      DIGE技術(shù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

      端粒酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

      細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

      掃描電鏡服務(wù)

      NF-KB p65活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

       

      慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)服務(wù)

       

      滬公網(wǎng)安備 31011802001676號(hào)

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