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      乳酸(LA)含量檢測(cè)操作步驟
      點(diǎn)擊次數(shù):6319 更新時(shí)間:2021-06-23

       

      乳酸LA)含量檢測(cè)試劑盒說明書微量法

      注意:正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

      規(guī)格:100T/48S

      產(chǎn)品內(nèi)容:

      提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;

      試劑一:液體20mL×1瓶,4℃保存

      試劑粉劑×1,-20保存。臨用前加入0.6ml試劑一充分溶解。可分裝后-20℃保存, 避免反復(fù)凍融;

      試劑三:粉劑×1瓶,-20℃避光保存。臨用前加入6mL試劑一充分溶解可分裝后-20℃保存,避免反復(fù)凍融

      試劑:粉劑×1瓶,-20℃避光保存。 臨用前每瓶加入6mL 試劑一混勻,可分裝后-20℃保存,避免反復(fù)凍融

      試劑:液體3mL×1瓶,4℃保存。

      標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1支,4℃保存。臨用前加入1.04mL提取液配成100µmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液

      色液的配制:臨用前根據(jù)用量按照試劑三(V):試劑四(V):試劑V=110.5的比例充分混勻,現(xiàn)配現(xiàn)用;

      產(chǎn)品說明:

      乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產(chǎn)物,與糖代謝、脂類代謝、蛋白質(zhì)代謝及細(xì)胞內(nèi)能量代謝密切相關(guān),乳酸含量是評(píng)估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標(biāo)。乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸,同時(shí)使NAD+還原生成NADHH+,H+傳遞給PMS生成的PMSH2還原特異性底物, 450nm處有特征吸收峰。

      自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

      天平、研缽/勻漿器、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋、乙醇和蒸餾水。

      操作步驟:

      一、樣本處理:

      • 組織:按照質(zhì)量(g:提取液一體積(mL)15~10的比例(建議稱取約0.1g,加入1mL提取液加入提取液,冰浴勻漿后于4℃,12000g離心10min后取上清待測(cè)。

      b. 細(xì)胞:按照細(xì)胞數(shù)量106個(gè):提取液一體積mL500~10001的比例(建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時(shí)間3min);4℃, 12000g離心10min后取上清待測(cè)。

      c. 血清(漿):取100µL血清(漿)加入0.9mL提取液,412000g離心10min后取上清待測(cè)。

      二、測(cè)定操作

      1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min,波長(zhǎng)調(diào)至450nm,分光光度計(jì)用蒸餾水調(diào)零。

      2、標(biāo)準(zhǔn)液的稀釋:將100µmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液用蒸餾水稀釋為10、5、2.5、1.250.6250.3125、0µmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液待測(cè)。

      3、加樣表:

       

      測(cè)定管

      對(duì)照管

      標(biāo)準(zhǔn)管

      空白管

      樣品(µL

      10

      10

      -

      -

      標(biāo)準(zhǔn)品(µL

      -

      -

      10

      -

      蒸餾水(µL

      -

      10

      -

      10

      試劑一(µL

      40

      40

      40

      40

      試劑二(µL

      10

      -

      10

      10

      工作液µL

      140

      140

      140

      140

      37℃準(zhǔn)確反應(yīng) 30min。450nm 處測(cè)定吸光值,分別記為 A 測(cè)定管,A 對(duì)照管,A 標(biāo)準(zhǔn)管,A 空白管,計(jì)算?A 測(cè)定=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管;?A 標(biāo)準(zhǔn)= A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管。

      三、乳酸含量的計(jì)算:

      1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

      以各標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為x軸,以其對(duì)應(yīng)的吸光值(?A標(biāo)準(zhǔn))為y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到標(biāo)準(zhǔn)方程

      y=kx+b,將?A測(cè)定帶入公式中得到xµmol/mL)。2、乳酸含量計(jì)算

      (1) 按照蛋白含量計(jì)算

      LA含量(µmol/mg prot=x×V ÷V ÷Cpr =x÷Cpr

      (2) 按照樣本質(zhì)量計(jì)算

      LA含量µmol/g 鮮重=x×V ÷(V ÷V 樣總×W)=x ÷W。

      (3) 按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

      LA含量(µmol/106 cell=x×V ÷(V ÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量)=x ÷細(xì)胞數(shù)量

      (4) 按照液體體積計(jì)算

      LA含量(µmol/mL= 10×x。

      V樣品:加入的樣品體積,0.01mL。:W:樣本質(zhì)量,g/mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL, 蛋白濃度需自行測(cè)定; V提取液:加入的提取液體積,1mL細(xì)胞數(shù)量,5×106個(gè);V液體:液體樣本體積,0.1mL。

      注意事項(xiàng):

      1. 若測(cè)定吸光值?A大于最大濃度標(biāo)準(zhǔn)品OD,請(qǐng)將樣品體積進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂尯?/font>

      再進(jìn)行測(cè)定,并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

       

      實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

       

      免疫組化IHC染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

      細(xì)胞、組織TUNEL凋亡染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

      試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

      實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

       

      透射電鏡服務(wù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

      石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

      核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

      免疫共沉淀(CHIRP)實(shí)驗(yàn)

      RNA結(jié)合蛋白免疫沉淀(RIP)實(shí)驗(yàn)代做

      酶聯(lián)免疫(ELISA)技術(shù)服務(wù)

      雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

      喹諾酮類快速檢測(cè)試劑盒

      組織芯片/微陣列定制技術(shù)服務(wù)

       

      染色質(zhì)免疫沉淀分析(CLIP)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

       

      多因子液相芯片技術(shù)(Luminex)實(shí)驗(yàn)

      免疫細(xì)胞化學(xué)ICC實(shí)驗(yàn)服務(wù)

      ATP/ADP檢測(cè)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

      蛋白雙向(2-D)電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)

      蛋白相互作用分析

      堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)

      PKC活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

      非標(biāo)定量實(shí)驗(yàn)

      (Label-free)

       

      DIGE技術(shù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)

      端粒酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

      細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

      掃描電鏡服務(wù)

      NF-KB p65活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

       

      慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)服務(wù)

      滬公網(wǎng)安備 31011802001676號(hào)

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