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      豬圓環病毒實時熒光PCR檢測試劑盒簡介
      點擊次數:676 更新時間:2022-10-27

      豬圓環病毒實時熒光PCR檢測試劑盒

       

       本試劑盒采用TaqMan探針法實時熒光PCR技術,是針對豬瘟病毒設計的檢測體系,用于疑似感染動物血清或組織等樣本的檢測。

      【產品名稱】

      通用名稱:豬瘟病毒熒光PCR檢測試劑盒

      英文名稱:Classical Swine Fever Virus Fluorescent PCR test kit

      【試劑盒組成】

      組成成份(25Tests/kit

      規格

      核酸擴增試劑

       

      RT-PCR反應液

      526.5µl×1

      Taq(5U/µl)

      8.5µl×1

      PCR enhancer

      5.5µl×1

      對照品

       

      陰性對照

      25µl×1

      陽性對照

      25µl×1

      注:不同批號的試劑組份不可混用。

      【儲存條件及有效期】

      本試劑盒貯存于-20℃的條件下有效期為6個月。

      【生產日期及批號】

      詳見包裝袋和外包裝盒。

      【適用儀器(熒光PCR檢測儀)

      Ø   ABI公司Prism7000、7300、7500系列

      Ø   RotorGene系列

      Ø   Bio-Rad公司的iCycler系列

      【自備試劑】

      核酸提取試劑。

      【樣本采集、存放及運輸】

      1.樣本采集:各類型樣本按照常規方法采集。

      2.存放:分離后的血清或者血漿樣本在2—8℃條件下保存應不超過72h-70℃以下可長期保存,但應避免反復凍融(最多凍融3次)。

      3.運輸:采用冰壺或泡沫箱加冰密封進行運輸。

      【檢驗方法】

      1.樣本處理:

      用戶可采用病毒RNA提取試劑盒提取RNA用于檢測或保存于-20℃(-80℃更佳)以待檢測。說明:陽性對照及陰性對照無需提取,直接上樣。

      2.擴增試劑準備(PCR前準備區):

      從試劑盒中取出RT-PCR 反應液、Taq酶及PCR Enhancer,室溫融化并振蕩混勻后,2000rpm離心10秒。設所需要的PCR反應管管數為nn = 樣本數 + 1管陰性對照 + 1管陽性對照),每個測試反應體系配制如下表:

       

      試劑

      RT-PCR反應液

      Taq

      PCR enchancer

      用量

      19.5 µl

      0.3µl

      0.2 µl

      計算好各試劑的使用量,加入一適當體積離心管中,充分混合均勻,2000rpm離心10秒,向設定的nPCR反應管中分別加入20 µl,轉移至樣本處理區。

      1.加樣(樣本處理區):

      向所設定的nPCR 反應管中分別加入待檢樣本RNA、陰性對照和陽性對照各5µl,蓋緊管蓋,轉移至檢測區。將PCR反應管排好放入PCR儀內,記錄樣本擺放順序。

      2.PCR擴增(檢測區)

      4.1       循環條件設置

      50℃:10 min;

      95℃:3 min;

      95℃:10sec, 60: 1min  40個循環。

      熒光信號收集設在60℃。反應體系設為25ul。

      4.2       儀器檢測通道選擇

      待測熒光為FAM熒光素,熒光PCR檢測儀熒光信號收集設定為FAM熒光素。

      3.結果分析條件設定:

      5.1       閾值(threshold)設定原則以閾值線剛好超過正常陰性對照曲線(無規則的噪音線)的最高點為準。

      5.2       基線(baseline)應選擇該次實驗指數擴增前所有樣本熒光信號比較穩定的一段區域(所有樣本熒光信號無較大波動),起始點(循環數)應避開熒光采集起始階段的信號波動,終止點(循環數)應比最早出現指數擴增的樣本Ct值減少1-2個循環。

      注:具體設置方法請參照各儀器使用說明書。

      4.質控標準:

      陰性對照的檢測結果應為陰性;

      陽性對照的Ct值應小于等于32.0。

      否則,此次實驗視為無效。

      1.結果判斷:

      Ø Ct值無讀數的樣本為陰性。

      Ø Ct≤38.0的樣本為陽性。

      Ø Ct值大于38.0的樣本建議重做。

      重做結果Ct值<40.0為陽性,否則為陰性。

      【試劑盒使用注意事項】

      1. 有關實驗室管理規范請嚴格按照行業行

      2. 本試劑盒僅用于體外檢測。

      3. 實驗請嚴格分區操作:

      第一區:PCR前準備區——準備擴增所需試劑;

      第二區:樣本處理區——待測樣本和對照品處理;

      第三區:檢測區——PCR擴增檢測。

      4. 各區物品均為專用,不得交叉使用,避免污染,實驗后即請清潔工作臺。

      5. 試劑盒內各試劑使用前,充分融化后請稍事離心。

      6. 在-20℃保存的樣本裂解產物,應在加樣前置室溫解凍,作短暫離心后使用。

      7. 分裝有反應液的反應管應扣蓋或裝入密實袋內再轉移至樣本區。

      8. 加樣時應使樣品完全落入反應液中,不應有樣品粘附于管壁上,加樣后應盡快蓋緊管蓋。

      9. 擴增完畢立即取出反應管,密封在專用塑料袋內,丟棄于指定地點。

      10. 反應液分裝時應盡量避免產生氣泡,上機前注意檢查各反應管是否蓋緊,以免熒光物質泄露污染儀器。

      11. 實驗中用過的吸頭請直接打入盛有1%次氯酸鈉的廢物缸內,并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄。

      12. 工作臺及各物品定期用1%次氯酸鈉、75%酒精或紫外燈進行消毒

       

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