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      小鼠外周血白細(xì)胞分離液試劑盒
      點擊次數(shù):3008 更新時間:2016-06-24

      WBC1092小鼠外周血白細(xì)胞分離液試劑盒

       

      小鼠外周血白細(xì)胞分離液試劑盒說明書
      (細(xì)胞培養(yǎng)及分子生物學(xué))
      【產(chǎn)品規(guī)格】
      200ml/Kit
      【產(chǎn)品組成】
      為方便廣大用戶使用,試劑內(nèi)容如下:

       

      名稱

      產(chǎn)品規(guī)格

      編號

      A

      小鼠外周血白細(xì)胞分離液

       

      200ml

      B

      樣本稀釋液(贈品)

      2010C1119

      200ml

      C

      清洗液(贈品)

      2010X1118

      200ml

      D

      紅細(xì)胞裂解液(贈品)

      NH4CL2009

      100ml

      E

      說明書

       

      1份
       

      【實驗前準(zhǔn)備】
      A.適用儀器
      zui大離心力可達 1200g的水平轉(zhuǎn)子離心機
      B.耗材

      產(chǎn)品名稱

      產(chǎn)品貨號

      產(chǎn)地

      15ml離心管散裝

      339650

      美國  NUNC

      15ml離心管架裝

      339651

      美國  NUNC

      50ml離心管散裝

      339652

      美國  NUNC

      50ml離心管架裝

      339653

      美國  NUNC

      無菌膠頭滴管或塑料滴管

       

       

      【檢驗方法】
      全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2的條件下進行。
      首先取抗凝血,根據(jù)樣本量大小,分以下兩種情況:
      情況 A:血液樣本量小于 5ml時,實驗方法如下:
      1.取一支15ml離心管,先加入  5ml分離液
      2.用吸管小心吸取血液樣本加于分離液液面上,400-500g,離心20-30min(注:如改
       變血液樣本及分離液用量,需相應(yīng)調(diào)整離心力及離心時間,具體離心條件需客戶自行摸

      索,以達到分離效果。)
      3.離心后用吸管小心吸取所有環(huán)狀乳白色細(xì)胞層(一層或兩層),加入10 ml清洗液(產(chǎn)
      品編號:2010X1118),混勻細(xì)胞。250g,離心 10min。重復(fù)洗滌 2-3次,即得所需白細(xì)
      胞。
      4.如有紅細(xì)胞殘留請使用紅細(xì)胞裂解液(產(chǎn)品編號:NH4CL2009)裂解紅細(xì)胞,具體操
      作方法詳見“紅細(xì)胞裂解液使用說明”。
      情況 B:血液樣本量大于等于 5ml 時,實驗方法如下:
      1.取一支適當(dāng)?shù)碾x心管,先加入與樣本等量的分離液。
      2.將血液樣本小心加于分離液之液面上, 450-650g(zui大離心力可至 1000g),離心
      20-30min。(注:根據(jù)血液樣本量確定離心條件,血液量越多,離心力越大,離心
      時間越長,具體離心條件需客戶自行摸索,以達到分離效果。加入血液樣本后,樣
      本及分離液總體積不得超過離心管總體積的三分之二)。
      3.剩余步驟同“情況 A”中步驟 3與步驟  4。
      【注意事項】
      1.全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2的條件下進行。為獲得的實驗結(jié)果,zui
      好在取血 2h 內(nèi)進行實驗,血液存放時間越長,細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后
      分離效果更差甚至不能達到分離目的。
      2.本實驗不要使用高聚合材質(zhì)(如聚苯乙烯)的塑料制品,應(yīng)使用無靜電、低靜電離
      心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品,因為靜電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面
      會變成毛面,影響細(xì)胞分離效果。
      3.分離液用量大于稀釋后血液樣本時,分離效果更佳。
      4.當(dāng)血液樣本粘度過高需稀釋時,*稀釋方法:將血液與樣本稀釋液(產(chǎn)品編號:
      2010C1119)1:1稀釋混勻備用。注:不當(dāng)?shù)南♂尫椒〞档图?xì)胞得率及活性。如血液樣
      本經(jīng)過稀釋則分離過程中需適當(dāng)降低離心力和離心時間。
      5.如實驗后細(xì)胞得率或活性過低,請技術(shù)以尋求幫助支持。
      【儲存條件及有效期】
      18-25保存,有效期 2年。本品易感染細(xì)菌,需無菌條件操作。無菌條件下操作,啟
      封后置常溫保存。如 4保存,本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶,影響分離效果。
      【參考值(參考范圍)】

      本實驗白細(xì)胞提取率及純度大于 80%。
      下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例,用戶可適當(dāng)進行參考。

      【相關(guān)實驗技術(shù)方案】
      1.所獲得白細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。
      2.所獲得白細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。
      3.所獲得白細(xì)胞的鑒定方法
      A.流式細(xì)胞技術(shù)
      B.免疫組化技術(shù)
      C.原位雜交技術(shù)
      D.PCR技術(shù)
      注:上述技術(shù)方案詳情請登陸本搜索“細(xì)胞分離、
      純化、擴增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊”,并在說明書項目欄下下載使用。
      【可能存在的問題及解決方法】
      1.由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示:

      出現(xiàn)情況

      出現(xiàn)原因

      建議解決方案

      離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層

      轉(zhuǎn)速過小或離心時間過短

      適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

      離心后目的細(xì)胞存在于分離液中

      轉(zhuǎn)速過大或離心時間過長

      適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

      離心后白環(huán)層彌散

      細(xì)胞密度過大

      調(diào)整細(xì)胞密度

      離心后白環(huán)層太淺或看不見

      細(xì)胞密度過小

      調(diào)整細(xì)胞密度

      2.本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心,其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地
      區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進行適當(dāng)調(diào)整。建議對離心條件進行調(diào)整時,恒定離
      心時間,對離心轉(zhuǎn)速進行調(diào)整。
      3.本分離液依照標(biāo)準(zhǔn),全部使用藥用級原料,性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同,可
      能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況,可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。
      注:在對離心條件進行調(diào)整時,離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g為基數(shù),直至達到分離效果,
        離心力zui小不得小于 400g,zui大不得大于 1200g。離心時間以 20-30min為準(zhǔn)。

      滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

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