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      人基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)ELISA檢測試劑盒使用說明書

      提 供 商: 上海研謹(jǐn)生物科技有限公司 資料大小:
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      詳細(xì)介紹

      本試劑盒只能用于科學(xué)研究,不得用于醫(yī)學(xué)診斷

      人(Human)基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)

      ELISA檢測試劑盒

      使用說明書

      檢測原理

      試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

      樣品收集、處理及保存方法

      1.  血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。

      2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

      3.  細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

      4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

      5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

      自備物品

      1. 酶標(biāo)儀(450nm)

      2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

      3. 37℃恒溫箱

      操作注意事項

      1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。

      2.  實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

      3.  濃度為0的S0號標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對照或者空白;按照說明書操作時樣本已經(jīng)稀釋5倍,最終結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。

      4.  嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

      5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

      試劑盒組成

      名稱

      96孔配置

      48孔配置

      備注

      微孔酶標(biāo)板

      12孔×8條

      12孔×4條

      標(biāo)準(zhǔn)品

      0.3mL*6管

      0.3mL*6管

      樣本稀釋液

      6mL

      3mL

      檢測抗體-HRP

      10mL

      5mL

      20×洗滌緩沖液

      25mL

      15mL

      按說明書進行稀釋

      底物A

      6mL

      3mL

      底物B

      6mL

      3mL

      終止液

      6mL

      3mL

      封板膜

      2張

      2張

      說明書

      1份

      1份

      自封袋

      1個

      1個

      注:標(biāo)準(zhǔn)品(S0-S5)濃度依次為:0、2.55102040 ng/mL

      試劑的準(zhǔn)備

       20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

      洗板方法

      1.  手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

      2.  自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

      操作步驟

      1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

      2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

      3.  樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。

      4.  除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

      5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機洗板)。

      6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

      7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

      結(jié)果判斷

       繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線:在Excel工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo),對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo),繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

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      試劑盒性能

      1.  準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.9900。

      2.  靈敏度:最di檢測濃度小于0.1 ng/mL。

      3.  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

      4.  重復(fù)性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

      5.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

      6.  有效期:6個月

      2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域生物醫(yī)學(xué)實驗外包及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色,是客戶您值得信賴的科研合作伙伴!

      如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

       

      實驗代做服務(wù):

       


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