大鼠尿微量白蛋白(ALB)elisa檢測試劑盒
本試劑盒僅供研究使用。
通用名：大鼠尿微量白蛋白(ALB)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的：
本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿、或相關組織液中尿微量白蛋白(ALB)的含量。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠尿微量白蛋白(ALB)水平。用純化的大鼠
尿微量白蛋白(ALB)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入尿微量白
蛋白(ALB)，再與HRP標記的尿微量白蛋白(ALB)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體
復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸
的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的尿微量白蛋白(ALB)呈正相關。用酶
標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中大鼠尿微量白蛋白
(ALB)的含量。
試劑盒組成
1 20倍濃縮洗滌液 30ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品(225ug/ml)0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
標本處理及要求
1．血清、血漿標本可直接測定；
2．尿液、腦脊液、腹腔液：2000-3000轉/分離心10分鐘后，取上清液待測。
3．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
4．采集后盡早進行實驗，若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反
復凍融。
操作步驟
1. 標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上按序設標準品孔10孔，在*、第二孔中分別
加標準品100μl，然后在*、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；再各取100μl分
別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后，在第
三孔和第四孔中先各取50μl棄掉；再各取50μl分別加到第五、第六孔中；再在第五、
第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加
到第七、第八孔中；再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、
第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中；再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，
混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為150
ug/ml，100ug/ml，50ug/ml，25ug/ml，12.5ug/ml)。
2. 加樣：分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、待測樣
品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣
品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此
重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止
液后15分鐘以內(nèi)進行。
計算
以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的
OD值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4．請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值
大于標準品孔*孔OD值的)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5．嚴格按說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
6．本試劑不同批號組分不得混用。
7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．底物請避光保存。
規(guī)格：
96人份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月
人尿微量白蛋白(ALB)ELISA試劑盒